البيانات الفنية
عمود/لوحة تحلية سيفاديكس جي-25 - تعليمات الاستخدام
مقدمة المنتج
يستخدم عمود/لوح تحلية ديكستران G-25 بشكل أساسي وظيفة الغربال الجزيئي في مركباته البوليمرية الهلامية من ديكستران ذات البنية الشبكية. ونظرًا لاختلاف أحجام الوزن الجزيئي للمواد المنفصلة، فعند مرور المواد المنفصلة عبر هلام G-25، تُحجز المواد ذات الوزن الجزيئي الكبير (مثل البروتينات) خارج جزيئات الهلام وتتدفق عبر الفجوة بينها. وتتميز العملية بقصر المدة وسرعة الحركة، مما يجعل المواد ذات الوزن الجزيئي الكبير تتدفق أولًا خارج العمود/اللوح. أما المواد ذات الوزن الجزيئي الصغير (مثل الأملاح) فيمكنها اختراق المسام الدقيقة لجزيئات الهلام، وتكون العملية طويلة وبطيئة، بينما تستغرق المواد ذات الوزن الجزيئي الأعلى وقتًا أطول للتدفق خارج عمود/لوح الهلام، مما يؤدي إلى غسلها في النهاية، وبالتالي فصل المواد.
تظهر معلمات وسائط سلسلة Sephadex G-25 في الجدول
| مشروع | المعلمية |
| سمات | جل أبيض متسخ |
| متوسط حجم الجسيمات (جاف) | 150±100ميكرومتر 92.8 |
| توزيع حجم الجسيمات (45-165 ميكرومتر)٪ | ≥80 |
| النطاق المنقسم (البرتغالية) | 100-5000 |
| نطاق الفصل (الجلوبيولين) | 1000-5000 |
| نسبة الماء (مل غراء رطب/جرام مسحوق جاف) | 2.3-2.7 |
| معدل التدفق الخطي (0.3 ميجا باسكال، سم/ساعة) | 697.1 |
| أقصى معدل تدفق (سم/ساعة) | 150 |
| حل الحفظ | 0.2M NaAc 20 في المائة إيثانول |
| ظروف التخزين | 4'C-30'C |
يشير رقم النموذج G إلى كمية الماء الممتصة لكل جرام من الجل، على سبيل المثال، يشير وسط الجل G-25 إلى امتصاص 2.5 مل من الماء لكل جرام من الجل الجاف، أي معامل تمدد الجل، وهو أيضًا حجم مسام جزيئات الجل.
تُستخدم وسائط الكروماتوغرافيا من سلسلة Sephadex G-25 على نطاق واسع في تبادل العازل، وتحلية البروتين، وفصل البروتينات ذات الأوزان الجزيئية المختلفة، وما إلى ذلك. يمكن أن يصل الحد الأقصى لحجم العينة للتحلية والتخزين المؤقت إلى 30% من حجم فراش العمود.
سير العمل
١. موازنة مكبر الصوت/الجهاز اللوحي: بعد تثبيت مكبر الصوت/الجهاز اللوحي المُحمّل مسبقًا بـ G-25 Sefadex في وضع رأسي، وازِن عمود/جهاز إزالة الأملاح G-25 باستخدام عازل بحجم يتراوح بين 5 و10 أضعاف حجم طبقة العمود. (ملاحظة: العازل هو العازل المطلوب استبداله، مثل PBS، أو الماء منزوع الأيونات، إلخ؛ انتبه جيدًا، وتحكم في معدل التدفق).
٢. أخذ العينات: بعد موازنة عمود/لوح الجل مع المحلول العازل، يُسحب العينة بالماصة ويُضاف ببطء إلى المنخل على سطح الجل. يُفتح الغطاء السفلي ويُترك العينة تدخل الجل تدريجيًا حتى تتجانس مع الجل. (ملاحظة: عادةً ما يكون حجم العينة في الأسفل ١٠-٣٠٪ من حجم طبقة العمود، ويجب ألا تكون لزوجة العينة عالية جدًا، وإلا ستُقصر مدة خدمة غدة G25).
٣. الإيلوشن: تُروى العينة بمحلول إيلوشن بعد دخولها بالكامل في الهلام. (ملاحظة: معدل تدفق العينة الموصى به هو حوالي ١-٢ مل/دقيقة. حجم الإيلوشن عادةً ما يكون ١.٢-٢.٠ ضعف حجم العينة).
4. التنقية والتجديد: يتم تغيير طبيعة بعض البروتينات في المحلول الملحي، لذلك قد يكون من الضروري تنقية هذه البروتينات عن طريق غسل فراش العمود بـ 0.2 مولار من هيدروكسيد الصوديوم أو أي منظف غير أيوني آخر.
5. التخزين: بعد التجربة، قم بالتخزين في محلول أزيد الصوديوم 0.02% أو محلول الإيثانول 20%.