دادههای فنی
دستورالعمل استفاده از ستون/صفحه نمکزدایی سفادکس g-25
معرفی محصول
ستون/صفحه نمکزدایی دکستران G-25 عمدتاً از عملکرد غربال مولکولی در ترکیبات پلیمری ژل دکستران با ساختار شبکهای استفاده میکند. با توجه به اندازههای مختلف وزن مولکولی مواد جدا شده، هنگامی که مواد جدا شده از ژل G-25 عبور میکنند، موادی با وزن مولکولی بالا (مانند پروتئینها) در خارج از ذرات ژل مسدود شده و از طریق شکاف بین ذرات ژل خارج میشوند، این فرآیند کوتاه و سرعت حرکت سریع است، بنابراین موادی با وزن مولکولی بالا ابتدا از ستون/صفحه خارج میشوند. موادی با وزن مولکولی پایین (مانند نمکها) میتوانند به داخل ریزمنافذ ذرات ژل نفوذ کنند، این فرآیند طولانی و کند است و موادی با وزن مولکولی بالاتر برای خروج از ستون/صفحه ژل زمان بیشتری نیاز دارند، بنابراین در نهایت شسته میشوند و بنابراین مواد جدا میشوند.
پارامترهای محیط کشت سری Sephadex G-25 در جدول نشان داده شده است.
| پروژه | پارامتری |
| ویژگیها | ژل سفید کثیف |
| اندازه متوسط ذرات (خشک) | ۱۵۰±۱۰۰ میکرومتر ۹۲.۸ |
| توزیع اندازه ذرات (45-165μm)٪ | ۸۰≥ |
| دامنه تقسیم (پرتغالی) | ۱۰۰-۵۰۰۰ |
| محدوده جداسازی (گلوبولین) | ۱۰۰۰-۵۰۰۰ |
| نسبت آب (میلیلیتر چسب مرطوب/گرم پودر خشک) | ۲.۳-۲.۷ |
| نرخ جریان خطی (0.3MPA، سانتیمتر/ساعت) | ۶۹۷.۱ |
| حداکثر سرعت جریان (سانتی متر در ساعت) | ۱۵۰ |
| محلول نگهداری | ۰.۲ مولار سدیم آکریلیک ۲۰ درصد اتانول |
| شرایط نگهداری | ۴'C-30'C |
شماره مدل G نشان دهنده میزان جذب آب به ازای هر گرم ژل است، به عنوان مثال محیط ژل G-25 نشان می دهد که به ازای هر گرم ژل خشک، 2.5 میلی لیتر آب جذب می شود، یعنی ضریب انبساط ژل که همان اندازه منافذ ذرات ژل نیز هست.
محیطهای کروماتوگرافی سری Sephadex G-25 به طور گسترده برای تبادل بافر، نمکزدایی پروتئین، جداسازی پروتئینهای با وزن مولکولی مختلف و غیره استفاده میشوند. حداکثر حجم نمونه برای نمکزدایی و بافرینگ میتواند تا 30٪ از حجم بستر ستون باشد.
گردش کار
۱. متعادل کردن بلندگو/قرص: هنگامی که بلندگو/قرص با سفادکس G-25 از پیش بارگذاری شده در حالت عمودی قرار گرفت، ستون/قرص نمکزدایی G-25 را با بافری به حجم ۵ تا ۱۰ برابر حجم لایه ستون متعادل کنید. (توجه: بافر، بافر مورد نظر برای جایگزینی است، مثلاً PBS، آب دیونیزه و غیره؛ مراقب باشید، سرعت جریان را کنترل کنید)
۲. نمونهبرداری: پس از اینکه ستون/پلیت ژل با بافر متعادل شد، نمونه را با پیپت برداشته و به آرامی آن را به الک روی سطح ژل اضافه کنید، درب پایینی را باز کنید و اجازه دهید نمونه به آرامی وارد ژل شود تا با ژل همسطح شود. (توجه: حجم نمونه در پایین معمولاً ۱۰ تا ۳۰ درصد حجم لایه ستون است، ویسکوزیته نمونه نباید خیلی زیاد باشد، در غیر این صورت عمر مفید غده G25 کوتاه میشود).
۳. شستشو: نمونه پس از ورود کامل به ژل، با یک بافر شستشو دهنده شستشو داده میشود. (توجه: سرعت جریان نمونه توصیه شده حدود ۱-۲ میلیلیتر در دقیقه است. حجم شستشو معمولاً ۱.۲-۲.۰ برابر حجم نمونه است).
۴. خالصسازی و احیا: برخی از پروتئینها در محلول نمکی دناتوره میشوند، بنابراین ممکن است لازم باشد این پروتئینها را با شستن بستر ستون با NaOH 0.2 مولار یا یک شوینده غیر یونی دیگر خالصسازی کنید.
۵. نگهداری: پس از آزمایش، در محلول سدیم آزید ۰.۰۲٪ یا محلول اتانول ۲۰٪ نگهداری شود.