Données techniques
Colonne/plaque de dessalement Sephadex G-25, mode d'emploi
Présentation du produit
La colonne/plaque de dessalement Dextran G-25 utilise principalement la fonction de tamis moléculaire dans ses composés polymères gélifiés de dextrane à structure réticulaire. En raison des différentes masses moléculaires des substances séparées, lorsque celles-ci traversent le gel G-25, les substances de masse moléculaire élevée (comme les protéines) sont bloquées à l'extérieur des particules de gel et s'écoulent par l'espace entre elles. Le processus est court et rapide, de sorte que les substances de masse moléculaire élevée s'écoulent en premier de la colonne/plaque. Les substances de faible masse moléculaire (par exemple, les sels) peuvent pénétrer dans les micropores des particules de gel. Le processus est long et lent, tandis que les substances de masse moléculaire élevée mettent plus de temps à s'écouler de la colonne/plaque de gel, elles sont donc finalement éliminées par lavage et ainsi séparées.
Les paramètres des supports de la série Sephadex G-25 sont indiqués dans le tableau
| Projet | paramétrique |
| Caractéristiques | Gel blanc sale |
| Taille moyenne des particules (sèches) | 150±100μm 92,8 |
| Répartition granulométrique （45-165 μm）% | ≥80 |
| Split Range (portugais) | 100-5000 |
| Plage de séparation (globuline) | 1000-5000 |
| Rapport eau (ml de colle humide/g de poudre sèche) | 2.3-2.7 |
| Débit linéaire (0,3 MPA, cm/h) | 697,1 |
| Débit maximal (cm/h) | 150 |
| Solution de conservation | 0,2 M NaAc 20 pour cent d'éthanol |
| conditions de stockage | 4°C-30°C |
Le numéro de modèle G indique la quantité d'eau absorbée par gramme de gel, par exemple, le milieu de gel G-25 indique que 2,5 ml d'eau sont absorbés par gramme de gel sec, c'est-à-dire le coefficient de dilatation du gel, qui est également la taille des pores des particules de gel.
Les supports de chromatographie de la série Sephadex G-25 sont largement utilisés pour l'échange de tampon, le dessalement des protéines, la séparation de protéines de différents poids moléculaires, etc. Le volume maximal d'échantillon pour le dessalement et le tamponnage peut atteindre 30 % du volume du lit de la colonne.
Flux de travail
1. Équilibrage du haut-parleur/tablette : Une fois le haut-parleur/tablette contenant le Sefadex G-25 préchargé en position verticale, équilibrez la colonne/tablette de dessalage G-25 avec un tampon représentant 5 à 10 fois le volume de la couche de la colonne. (Remarque : le tampon est le tampon à remplacer, par exemple : PBS, eau déionisée, etc. ; veillez à contrôler le débit.)
2. Échantillonnage : Une fois la colonne/plaque de gel équilibrée avec le tampon, pipetez l'échantillon et ajoutez-le lentement au tamis à la surface du gel, ouvrez le bouchon inférieur et laissez l'échantillon pénétrer lentement dans le gel jusqu'à ce qu'il soit au ras du gel. (Remarque : le volume de l'échantillon au fond est généralement de 10 à 30 % du volume de la couche de colonne, la viscosité de l'échantillon ne doit pas être trop élevée, sinon la durée de vie du presse-étoupe G25 sera raccourcie).
3. Élution : L'échantillon est élué avec un tampon d'élution après avoir complètement pénétré dans le gel. (Remarque : le débit d'échantillon recommandé est d'environ 1 à 2 ml/min. Le volume d'élution est généralement de 1,2 à 2,0 fois le volume de l'échantillon).
4. Purification et régénération : Certaines protéines sont dénaturées en solution saline, il peut donc être nécessaire de purifier ces protéines en lavant le lit de la colonne avec 0,2 M de NaOH ou un autre détergent non ionique.
5. Stockage : Après l'expérience, conserver dans une solution d'azoture de sodium à 0,02 % ou dans une solution d'éthanol à 20 %.