核酸抽出カラムの抽出方法と原理

核酸はデオキシリボ核酸(DNA)とリボ核酸(RNA)に分けられ、そのうちRNAは機能の違いによりリボソームRNA(rRNA)、メッセンジャーRNA(mRNA)、トランスファーRNA(tRNA)に分けられます。

DNAは主に核、ミトコンドリア、葉緑体に集中しており、RNAは主に細胞質に分布しています。

核酸にはプリン塩基やピリミジン塩基が共役二重結合を持っているため、紫外線を吸収する性質があります。DNAナトリウム塩の紫外吸収は260nm付近であり、その吸光度はA260で表され、230nmに吸収の谷があるため紫外分光法が使用できます。核酸はルミノメーターによって定量的および定性的に測定されます。

核酸は両性電解質であり、ポリ酸に相当します。核酸は、中性またはアルカリ性の緩衝液を使用して陰イオンに解離し、電場に置くと陽極に向かって移動します。これが電気泳動の原理です。

核酸抽出カラムの抽出方法と原理

核酸の抽出と精製の原理と要件

1. 核酸の一次構造の完全性を確保する

2. 他の分子の混入を排除する(DNA抽出時のRNA干渉の排除など)

3. 核酸サンプルには酵素を阻害する有機溶媒や高濃度の金属イオンがあってはなりません。

4. タンパク質、多糖類、脂質などの高分子物質を極力減らす

核酸の抽出・精製方法

1. フェノール・クロロホルム抽出法

1956年に発明されました。細胞破壊液または組織ホモジェネートをフェノール/クロロホルムで処理した後、主にDNAを含む核酸成分が水相に溶解し、主に脂質が有機相に、タンパク質が両者の間に位置します。段階。

2. アルコール沈殿

エタノールは核酸の水和層を除去し、負に帯電したリン酸基を露出させることができ、NA﹢ などの正に帯電したイオンはリン酸基と結合して沈殿を形成する可能性があります。

3. クロマトグラフィーカラム法

特殊なシリカベースの吸着材により、DNA は特異的に吸着され、RNA とタンパク質はスムーズに通過し、高塩と低 pH で核酸を結合し、低塩と高 pH で溶出して核酸を分離精製します。酸。

4. 熱分解アルカリ法

アルカリ抽出は主に、共有結合で閉じた環状プラスミドと直鎖状クロマチンの間のトポロジーの違いを利用してそれらを分離します。アルカリ条件下では、変性タンパク質は可溶になります。

5. 沸騰熱分解法

DNA 溶液は熱処理され、直鎖状 DNA 分子の特性を利用して、遠心分離によって変性タンパク質や細胞破片によって形成された沈殿物から DNA 断片を分離します。

6. ナノ磁性ビーズ法

ナノテクノロジーを使用して超常磁性ナノ粒子の表面を改良および修飾することにより、超常磁性酸化ケイ素ナノ磁性ビーズが調製される。磁気ビーズは、顕微鏡界面上の核酸分子を特異的に認識し、効率的に結合することができます。シリカ ナノスフィアの超常磁性特性を利用し、カオトロピック塩 (塩酸グアニジン、イソチオシアン酸グアニジンなど) と外部磁場の作用下で、血液、動物組織、食品、病原微生物、その他のサンプルから DNA と RNA が単離されました。


投稿日時: 2022 年 3 月 18 日