Метад і прынцып экстракцыі ў калонцы экстракцыі нуклеінавых кіслот

Нуклеінавая кіслата падзяляецца на дэзаксірыбануклеінавую кіслату (ДНК) і рыбануклеінавую кіслату (РНК), сярод якіх РНК можна падзяліць на рыбасомальную РНК (рРНК), інфармацыйную РНК (мРНК) і пераносную РНК (тРНК) у адпаведнасці з рознымі функцыямі.

ДНК у асноўным сканцэнтравана ў ядры, мітахондрыях і хларапластах, а РНК у асноўным размяркоўваецца ў цытаплазме.

Паколькі пурынавыя асновы і пірымідынавыя асновы маюць кан'югаваныя двайныя сувязі ў нуклеінавых кіслотах, нуклеінавыя кіслоты валодаюць характарыстыкамі паглынання ультрафіялету.Ультрафіялетавае паглынанне натрыевых соляў ДНК складае каля 260 нм, а яго паглынанне выражаецца як A260, і яно знаходзіцца на беразе паглынання пры 230 нм, таму можна выкарыстоўваць ультрафіялетавую спектраскапію.Нуклеінавыя кіслоты колькасна і якасна вызначаюць люминометром.

Нуклеінавыя кіслоты - гэта амфаліты, якія эквівалентныя полікіслотам.Нуклеінавыя кіслоты могуць быць дысацыяваныя на аніёны з дапамогай нейтральных або шчолачных буфераў і змешчаны ў электрычнае поле, каб рухацца да анода.Гэта прынцып электрафарэзу.

Метад і прынцып экстракцыі ў калонцы экстракцыі нуклеінавых кіслот

Прынцыпы і патрабаванні да вылучэння і ачысткі нуклеінавых кіслот

1. Забяспечыць цэласнасць першаснай структуры нуклеінавых кіслот

2. Ліквідаваць забруджванне іншымі малекуламі (напрыклад, выключыць інтэрферэнцыю РНК пры вылучэнні ДНК)

3. У пробах нуклеінавых кіслот не павінна быць арганічных растваральнікаў і высокіх канцэнтрацый іёнаў металаў, якія інгібіруюць ферменты

4. Паменшыце колькасць макрамалекулярных рэчываў, такіх як бялкі, поліцукрыды і ліпіды, наколькі гэта магчыма

Метад экстракцыі і ачысткі нуклеінавых кіслот

1. Метад экстракцыі фенолам/хлараформам

Ён быў вынайдзены ў 1956 годзе. Пасля апрацоўкі разбітай клетачнай вадкасці або тканкавага гамагенату фенолам/хлараформам кампаненты нуклеінавых кіслот, у асноўным ДНК, раствараюцца ў воднай фазе, ліпіды ў асноўным знаходзяцца ў арганічнай фазе, а вавёркі знаходзяцца паміж двума фазы.

2. Спіртавы асадак

Этанол можа ліквідаваць пласт гідратацыі нуклеінавай кіслаты і агаліць адмоўна зараджаную фасфатную групу, а станоўча зараджаныя іёны, такія як NA﹢, могуць злучацца з фасфатнай групай, утвараючы асадак.

3. Метад храматаграфічнай калонкі

Дзякуючы спецыяльнаму адсорбцыйнаму матэрыялу на аснове дыяксіду крэмнія ДНК можа быць спецыяльна адсарбавана, у той час як РНК і бялок могуць бесперашкодна праходзіць, а затым выкарыстоўваць высокі ўзровень солі і нізкі pH для звязвання нуклеінавых кіслот і элюіраванне нізкім утрыманнем солі і высокім pH для аддзялення і ачысткі нуклеінавых кіслата.

4. Метад тэрмічнага крэкінгу шчолаччу

Шчолачная экстракцыя ў асноўным выкарыстоўвае тапалагічныя адрозненні паміж кавалентна замкнёнымі кругавымі плазмідамі і лінейным храмацінам для іх падзелу.У шчолачных умовах дэнатураваныя вавёркі растваральныя.

5. Метад кіпячага піролізу

Раствор ДНК падвяргаецца тэрмічнай апрацоўцы, каб скарыстацца ўласцівасцямі лінейных малекул ДНК аддзяляць фрагменты ДНК ад асадка, утворанага дэнатураванымі вавёркамі і клеткавым смеццем пры цэнтрыфугаванні.

6. Метад нанамагнітных шарыкаў

Выкарыстоўваючы нанатэхналогіі для паляпшэння і мадыфікацыі паверхні суперпарамагнітных наначасціц, суперпарамагнітныя нанамагнітныя шарыкі аксіду крэмнію падрыхтаваны.Магнітныя шарыкі могуць спецыяльна распазнаваць і эфектыўна звязвацца з малекуламі нуклеінавых кіслот на мікраскапічным інтэрфейсе.Выкарыстоўваючы суперпарамагнітныя ўласцівасці нанасфер кремнезема, пад дзеяннем хаатропных соляў (гуанідзіна гідрахларыд, гуанідзіна изотиоцианат і інш.) і вонкавага магнітнага поля былі вылучаныя ДНК і РНК з крыві, тканак жывёл, ежы, патагенных мікраарганізмаў і іншых узораў.


Час публікацыі: 18 сакавіка 2022 г