Dane techniczne
Kolumna/płytka odsalania sephadex g-25 instrukcja użytkowania
Wprowadzenie do produktu
Kolumna/płytka odsalania Dextran G-25 wykorzystuje głównie funkcję sita molekularnego w swoich żelowych związkach polimerowych dekstranu o strukturze sieciowej. Ze względu na różne rozmiary mas cząsteczkowych oddzielonych substancji, gdy oddzielone substancje przechodzą przez żel G-25, substancje o dużej masie cząsteczkowej (takie jak białka) są blokowane na zewnątrz cząstek żelu i wypływają przez szczelinę między cząstkami żelu, proces jest krótki, a prędkość ruchu jest duża, więc substancje o dużej masie cząsteczkowej wypłyną z kolumny/płytki jako pierwsze. Substancje o małej masie cząsteczkowej (np. sole) mogą wnikać w mikropory cząstek żelu, proces jest długi i powolny, a substancje o wyższej masie cząsteczkowej potrzebują więcej czasu, aby wypłynąć z kolumny/płytki żelowej, więc są ostatecznie wypłukiwane, a zatem substancje są oddzielane.
Parametry mediów serii Sephadex G-25 przedstawiono w tabeli
| Projekt | parametryczny |
| Cechy | Żel w kolorze brudnej bieli |
| Średnia wielkość cząstek (sucha) | 150±100μm 92,8 |
| Rozkład wielkości cząstek (45-165μm)% | ≥80 |
| Split Range (portugalski) | 100-5000 |
| Zakres separacji (globulina) | 1000-5000 |
| Stosunek wody (ml mokrego kleju/g suchego proszku) | 2.3-2.7 |
| Liniowy przepływ (0,3 MPA, cm/h) | 697.1 |
| Maksymalna szybkość przepływu (cm/h) | 150 |
| Roztwór konserwujący | 0,2M NaAc 20 procent etanolu |
| warunki przechowywania | Temperatura 4'C-30'C |
Numer modelu G wskazuje ilość wody wchłoniętej na gram żelu. Przykładowo, medium żelowe G-25 wskazuje, że na gram suchego żelu wchłonięte zostaje 2,5 ml wody, czyli współczynnik rozszerzalności żelu, który jest również rozmiarem porów cząstek żelu.
Nośniki chromatograficzne Sephadex serii G-25 są powszechnie stosowane do wymiany buforów, odsalania białek, rozdzielania białek o różnych masach cząsteczkowych itp. Maksymalna objętość próbki do odsalania i buforowania może wynosić do 30% objętości złoża kolumny.
Przepływ pracy
1. Wyważanie głośnika/tabletu: Gdy głośnik/tablet z wstępnie załadowanym G-25 Sefadex znajdzie się w pozycji pionowej, wyważ kolumnę/tablet odsalającą G-25 buforem o objętości 5 do 10 razy większej od objętości warstwy kolumny. (Uwaga: bufor to pożądany bufor do zastąpienia, np. PBS, woda dejonizowana itp.; zachowaj ostrożność, kontroluj szybkość przepływu)
2. Pobieranie próbek: Po zrównoważeniu kolumny/płytki żelowej buforem, odpipetuj próbkę i powoli dodaj ją do sita na powierzchni żelu, otwórz dolną pokrywę i pozwól próbce powoli dostać się do żelu, aż zostanie z nim zrównana. (Uwaga: objętość próbki na dole wynosi zwykle 10-30% objętości warstwy kolumny, lepkość próbki nie powinna być zbyt wysoka, w przeciwnym razie żywotność dławika G25 ulegnie skróceniu).
3. Elucja: Próbka jest eluowana buforem eluującym po całkowitym wniknięciu do żelu. (Uwaga: Zalecana szybkość przepływu próbki wynosi około 1-2 ml/min. Objętość elucji jest zwykle 1,2-2,0 razy większa od objętości próbki).
4. Oczyszczanie i regeneracja: Niektóre białka ulegają denaturacji w roztworze soli fizjologicznej, dlatego może być konieczne oczyszczenie tych białek poprzez przemycie złoża kolumny 0,2 M NaOH lub innym niejonowym detergentem.
5. Przechowywanie: Po zakończeniu eksperymentu przechowywać w 0,02% roztworze azydku sodu lub 20% roztworze etanolu.