ข้อมูลทางเทคนิค
คำแนะนำการใช้งานคอลัมน์/แผ่นแยกเกลือ Sephadex G-25
การแนะนำผลิตภัณฑ์
คอลัมน์/แผ่นสำหรับการแยกเกลือออกจากน้ำเดกซ์แทรน G-25 จะใช้ฟังก์ชันตะแกรงโมเลกุลเป็นหลักในสารประกอบโพลีเมอร์เจลของเดกซ์แทรนที่มีโครงสร้างแบบเครือข่าย เนื่องจากสารที่แยกออกมามีขนาดน้ำหนักโมเลกุลต่างกัน เมื่อสารที่แยกออกมาผ่านเจล G-25 สารที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูง (เช่น โปรตีน) จะถูกบล็อกไว้ภายนอกอนุภาคเจลและไหลออกทางช่องว่างระหว่างอนุภาคเจล กระบวนการนี้สั้นและความเร็วในการเคลื่อนที่เร็ว ดังนั้น สารที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงจะไหลออกจากคอลัมน์/แผ่นก่อน สารที่มีน้ำหนักโมเลกุลเล็ก (เช่น เกลือ) สามารถแทรกซึมเข้าไปในรูพรุนขนาดเล็กของอนุภาคเจล กระบวนการนี้ยาวนานและช้า และสารที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงกว่าจะใช้เวลานานขึ้นในการไหลออกจากคอลัมน์/แผ่นเจล ดังนั้นสารเหล่านี้จึงถูกชะล้างออกไปในที่สุด และด้วยเหตุนี้ สารเหล่านี้จึงถูกแยกออก
พารามิเตอร์ของสื่อซีรีส์ Sephadex G-25 แสดงอยู่ในตาราง
| โครงการ | พารามิเตอร์ |
| คุณสมบัติ | เจลสีขาวสกปรก |
| ขนาดอนุภาคเฉลี่ย (แห้ง) | 150±100ไมโครเมตร 92.8 |
| การกระจายขนาดอนุภาค (45-165μm)% | ≥80 |
| สปลิทเรนจ์ (โปรตุเกส) | 100-5000 |
| ระยะการแยก (โกลบูลิน) | 1000-5000 |
| อัตราส่วนน้ำ (มล.กาวเปียก/ก.ผงแห้ง) | 2.3-2.7 |
| อัตราการไหลเชิงเส้น (0.3MPA, ซม./ชม.) | 697.1 |
| อัตราการไหลสูงสุด (ซม./ชม.) | 150 |
| สารละลายถนอมอาหาร | 0.2M NaAc เอทานอล 20 เปอร์เซ็นต์ |
| เงื่อนไขการเก็บรักษา | 4'C-30'C |
หมายเลขรุ่น G ระบุปริมาณน้ำที่ดูดซับต่อเจล 1 กรัม เช่น เจล G-25 ระบุว่าเจลแห้ง 1 กรัมสามารถดูดซับน้ำได้ 2.5 มิลลิลิตร หรือก็คือค่าสัมประสิทธิ์การขยายตัวของเจล ซึ่งก็คือขนาดรูพรุนของอนุภาคเจลด้วยเช่นกัน
สื่อโครมาโตกราฟีซีรีส์ Sephadex G-25 ถูกใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ การแยกเกลือออกจากโปรตีน การแยกโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่างกัน เป็นต้น ปริมาตรตัวอย่างสูงสุดสำหรับการแยกเกลือออกจากและการบัฟเฟอร์สามารถสูงถึง 30% ของปริมาตรคอลัมน์เบด
เวิร์กโฟลว์
1. การปรับสมดุลของลำโพง/แท็บเล็ต: เมื่อลำโพง/แท็บเล็ตที่มี Sefadex G-25 ที่โหลดไว้ล่วงหน้าอยู่ในตำแหน่งตั้งตรงแล้ว ให้ปรับสมดุลคอลัมน์/แท็บเล็ตการกำจัดเกลือ G-25 ด้วยบัฟเฟอร์ที่มีปริมาตร 5 ถึง 10 เท่าของชั้นคอลัมน์ (หมายเหตุ: บัฟเฟอร์คือบัฟเฟอร์ที่ต้องการแทนที่ เช่น PBS น้ำดีไอออนไนซ์ ฯลฯ โปรดระมัดระวัง ควบคุมอัตราการไหล)
2. การสุ่มตัวอย่าง: หลังจากที่คอลัมน์/แผ่นเจลสมดุลกับบัฟเฟอร์แล้ว ให้ปิเปตตัวอย่างแล้วค่อยๆ เติมลงในตะแกรงบนพื้นผิวเจล เปิดฝาด้านล่างและปล่อยให้ตัวอย่างเข้าไปในเจลอย่างช้าๆ จนกว่าจะเสมอระดับเจล (หมายเหตุ: ปริมาตรตัวอย่างที่ด้านล่างโดยปกติคือ 10-30% ของปริมาตรชั้นคอลัมน์ ความหนืดของตัวอย่างไม่ควรสูงเกินไป มิฉะนั้น อายุการใช้งานของต่อม G25 จะสั้นลง)
3. การชะ: ตัวอย่างจะถูกชะออกด้วยบัฟเฟอร์ชะหลังจากที่เข้าไปในเจลจนหมดแล้ว (หมายเหตุ: อัตราการไหลของตัวอย่างที่แนะนำคือประมาณ 1-2 มล./นาที ปริมาตรการชะออกโดยทั่วไปจะอยู่ที่ 1.2-2.0 เท่าของปริมาตรตัวอย่าง)
4. การทำให้บริสุทธิ์และการสร้างใหม่: โปรตีนบางชนิดจะถูกทำให้เสียสภาพในสารละลายน้ำเกลือ ดังนั้นอาจจำเป็นต้องทำให้โปรตีนเหล่านี้บริสุทธิ์โดยการล้างคอลัมน์เบดด้วย NaOH 0.2 M หรือผงซักฟอกที่ไม่ใช่อิออนอื่นๆ
5. การจัดเก็บ: หลังจากการทดลองให้เก็บในสารละลายโซเดียมอะไซด์ 0.02% หรือสารละลายเอธานอล 20%