Dữ liệu kỹ thuật
Hướng dẫn sử dụng cột/tấm khử muối sephadex g-25
Giới thiệu sản phẩm
Cột/tấm khử muối Dextran G-25 chủ yếu sử dụng chức năng sàng phân tử trong hợp chất polyme gel của dextran có cấu trúc mạng. Do kích thước trọng lượng phân tử khác nhau của các chất được tách ra, khi các chất được tách ra đi qua gel G-25, các chất có trọng lượng phân tử lớn (như protein) bị chặn bên ngoài các hạt gel và chảy ra qua khe hở giữa các hạt gel, quá trình này ngắn và tốc độ di chuyển nhanh, do đó các chất có trọng lượng phân tử lớn sẽ chảy ra khỏi cột/tấm trước. Các chất có trọng lượng phân tử nhỏ (ví dụ muối) có thể xâm nhập vào các lỗ rỗng nhỏ của các hạt gel, quá trình này dài và chậm, còn các chất có trọng lượng phân tử cao hơn mất nhiều thời gian hơn để chảy ra khỏi cột/tấm gel, do đó cuối cùng chúng bị rửa trôi và do đó các chất được tách ra.
Các thông số của phương tiện Sephadex G-25 series được hiển thị trong bảng
| Dự án | tham số |
| Đặc trưng | Gel trắng bẩn |
| Kích thước hạt trung bình (khô) | 150±100μm 92,8 |
| Phân bố kích thước hạt （45-165μm）% | ≥80 |
| Split Range (Tiếng Bồ Đào Nha) | 100-5000 |
| Khoảng cách phân tách (Globulin) | 1000-5000 |
| Tỷ lệ nước (ml keo ướt/g bột khô) | 2.3-2.7 |
| Lưu lượng tuyến tính (0,3MPA, cm/h) | 697,1 |
| Lưu lượng dòng chảy tối đa (cm/h) | 150 |
| Dung dịch bảo quản | 0,2M NaAc 20 phần trăm etanol |
| điều kiện lưu trữ | 4'C-30'C |
Số hiệu model G biểu thị lượng nước hấp thụ trên một gam gel, ví dụ, môi trường gel G-25 biểu thị rằng 2,5 ml nước được hấp thụ trên một gam gel khô, tức là hệ số giãn nở của gel, đây cũng là kích thước lỗ chân lông của các hạt gel.
Môi trường sắc ký dòng Sephadex G-25 được sử dụng rộng rãi để trao đổi đệm, khử muối protein, tách protein có trọng lượng phân tử khác nhau, v.v. Thể tích mẫu tối đa để khử muối và đệm có thể lên tới 30% thể tích nền cột.
Quy trình làm việc
1. Cân bằng Loa/Máy tính bảng: Khi loa/máy tính bảng có G-25 Sefadex được nạp sẵn ở vị trí thẳng đứng, cân bằng cột/máy tính bảng khử muối G-25 với dung dịch đệm gấp 5 đến 10 lần thể tích của lớp cột. (Lưu ý: Dung dịch đệm là dung dịch đệm mong muốn để thay thế, ví dụ PBS, nước khử ion, v.v.; hãy cẩn thận, kiểm soát tốc độ dòng chảy)
2. Lấy mẫu: Sau khi cột gel/đĩa cân bằng với đệm, dùng pipet lấy mẫu và từ từ cho vào rây trên bề mặt gel, mở nắp đáy và cho mẫu từ từ đi vào gel cho đến khi ngang bằng với gel. (Lưu ý: Thể tích mẫu ở đáy thường bằng 10-30% thể tích lớp cột, độ nhớt mẫu không được quá cao, nếu không tuổi thọ của tuyến G25 sẽ bị rút ngắn).
3. Rửa giải: Mẫu được rửa giải bằng dung dịch đệm rửa giải sau khi đã đi hoàn toàn vào gel. (Lưu ý: Tốc độ dòng mẫu được khuyến nghị là khoảng 1-2 ml/phút. Thể tích rửa giải thường gấp 1,2-2,0 lần thể tích mẫu).
4. Làm sạch và tái sinh: Một số protein bị biến tính trong dung dịch muối, do đó có thể cần phải làm sạch các protein này bằng cách rửa cột bằng NaOH 0,2 M hoặc chất tẩy rửa không ion khác.
5. Bảo quản: Sau khi thí nghiệm, bảo quản trong dung dịch natri azide 0,02% hoặc dung dịch ethanol 20%.