A separazione è a purificazione di e prutezione hè largamente usata in a ricerca è l'applicazione di biochimica è hè una cumpetenza operativa impurtante.Una cellula eucariota tipica pò cuntene millaie di proteini diffirenti, certi sò assai ricchi è certi cuntenenu solu uni pochi di copie.Per studià un certuproteina, hè necessariu prima purificà a proteina da altre proteini è molécule non-protein.

1. Salting-out mètudu diproteina:

U sali neutru hà un effettu significativu nantu à a solubilità di a proteina.In generale, cù l'aumentu di a cuncentrazione di u sali sottu una cuncentrazione di sali bassa, a solubilità di a proteina aumenta.Questu hè chjamatu salatura;quandu a cuncentrazione di u sali cuntinueghja à aumentà, A solubilità di a proteina diminuisce à varii gradi è si separa unu dopu l'altru.Stu fenominu hè chjamatu salting out.

2. Metudu di stacking point isoelectric:

A repulsione elettrostatica trà e particelle hè a più chjuca quandu a proteina hè statica, cusì a solubilità hè ancu a più chjuca.I punti isoelettrici di diverse proteini sò diffirenti.U pH di a suluzione di cundizzioni pò ièssiri usatu pi ghjunghje sin'à u puntu isoelectric di una prutiìna Fà accumule, ma stu mètudu hè raramenti usatu solu è pò esse cumminati cù u metudu salting-out.

3.Dialisi è ultrafiltrazione:

A dialisi usa una membrana semi-permeable per separà e proteine ​​​​di diverse dimensioni molecolari.U metudu di ultrafiltrazione usa alta pressione o forza centrifuga per fà chì l'acqua è altre molécule di solu solu petite passanu per una membrana semi-permeable, mentriproteinaresta nantu à a membrana.Pudete sceglie diverse dimensioni di pori per intercepte proteine ​​​​di diversi pesi moleculari.

4.Metudu di filtrazione di gel:

Chjamatu ancu cromatografia d'esclusione di taglia o cromatografia di tagliu moleculare, questu hè unu di i metudi più utili per separà i mischi di prutezione secondu a dimensione moleculare.I materiali di imballaggio più cumunimenti usati in a colonna sò gel di glucose (Sephadex ged) è gel d'agarose (gel d'agarose).

5.Electrophoresis:

Sutta a listessa cundizione di pH, diverse proteini ponu esse siparati per via di i so diversi pesi moleculari è e diverse carichi in u campu elettricu.Hè vale a pena attente à l'elettroforesi di l'isoelectric set, chì usa un ampholyte cum'è trasportatore.Durante l'elettroforesi, l'amfolyte forma un gradiente di pH aghjuntu gradualmente da l'elettrodu pusitivu à l'elettrodu negativu.Quandu a proteina cun una certa carica nata in questu, ghjunghjerà l'una à l'altru.A pusizioni pH di u puntu elettricu hè discontinuu, è stu metudu pò esse usatu per analizà è preparà diverse proteini.

Cromatografia di cumunicazione 6.Ion:

L'agenti di cumunicazione ionica includenu l'agenti di cumunicazione cationichi (cum'è carboxymethyl cellulosa; CM-cellulosa) è l'agenti di cumunicazione anionicu (dietilaminoetil cellulosa).Quandu passa per a colonna di cromatografia di cumunicazione ionica, a proteina cù a carica opposta à l'agente di cumunicazione ionica hè adsorbita nantu à l'agente di cumunicazione ionica, è dopu l'adsorbitu.proteinahè eluutu cambiando u pH o a forza ionica.

7.Cromatografia di affinità:

A cromatografia di affinità hè un metudu estremamente utile per separà e proteine.Spessu richiede solu un passu per separà una certa proteina per esse purificata da una mistura di proteina disordinata cù alta purezza.

Stu metudu hè basatu annantu à u ligame specificu piuttostu chè covalente di certe proteini à una altra molécula chjamata ligand (Ligand).

U principiu di basi:

E proteini esistenu in una mistura disordinata in tessuti o cellule, è ogni tipu di cellula cuntene millaie di proteine ​​​​sferenti.Dunque, a distinzione trà e proteini hè una parte impurtante di a biochimica, è ùn hè micca stata sola.O un inseme di metudi pronti ponu sguassà ogni tipu di proteina da una proteina mischiata disordinata, cusì parechji metudi sò spessu usati in cumminazione.