단백질의 분리 및 정제는 생화학 연구 및 응용에 널리 사용되며 중요한 운영 기술입니다.전형적인 진핵 세포는 수천 개의 서로 다른 단백질을 포함할 수 있으며, 일부는 매우 풍부하고 일부는 단지 몇 개의 사본만 포함합니다.특정 과목을 공부하기 위해서는단백질, 먼저 다른 단백질과 비단백질 분자로부터 단백질을 정제하는 것이 필요합니다.

1. 염석방법단백질:

중성염은 단백질의 용해도에 중요한 영향을 미칩니다.일반적으로 염분농도가 낮을수록 염분농도가 증가할수록 단백질의 용해도는 증가한다.이것을 염장이라고 합니다.염분 농도가 계속 증가하면 단백질의 용해도는 다양한 정도로 감소하고 차례로 분리됩니다.이 현상을 염석이라고 합니다.

2. 등전점 적층 방식:

단백질이 정적일 때 입자 사이의 정전기적 반발력이 가장 작아서 용해도도 가장 작습니다.다양한 단백질의 등전점은 다릅니다.컨디셔닝 용액의 pH는 단백질의 등전점에 도달하여 축적되게 할 수 있으나 이 방법은 단독으로 사용되는 경우가 거의 없으며 염석법과 병용할 수 있다.

3. 투석 및 한외여과:

투석은 반투막을 사용하여 다양한 분자 크기의 단백질을 분리합니다.한외여과법은 높은 압력이나 원심력을 이용하여 물과 기타 작은 용질 분자가 반투과막을 통과하도록 하는 방식입니다.단백질멤브레인에 남아 있습니다.다양한 분자량의 단백질을 차단하기 위해 다양한 기공 크기를 선택할 수 있습니다.

4. 젤 여과 방법:

크기 배제 크로마토그래피 또는 분자체 크로마토그래피라고도 불리는 이는 분자 크기에 따라 단백질 혼합물을 분리하는 가장 유용한 방법 중 하나입니다.컬럼에 가장 일반적으로 사용되는 충전재는 포도당 젤(Sephadex ged)과 아가로스 젤(agarose gel)입니다.

5. 전기 영동:

동일한 pH 조건에서 다양한 단백질은 분자량이 다르고 전기장의 전하가 다르기 때문에 분리될 수 있습니다.양성전해질을 캐리어로 사용하는 등전위 전기영동에 주목할 가치가 있습니다.전기영동 동안 양성전해질은 양극에서 음극으로 점차적으로 첨가되는 pH 구배를 형성합니다.일정한 전하를 지닌 단백질이 그 안에서 헤엄치면 서로 닿게 됩니다.전기점의 pH 위치는 불연속적이므로 이 방법을 사용하면 다양한 단백질을 분석하고 제조할 수 있습니다.

6. 이온 통신 크로마토그래피:

이온 전달제에는 양이온 전달제(예: 카르복시메틸 셀룰로오스; CM-셀룰로오스) 및 음이온 전달제(디에틸아미노에틸 셀룰로오스)가 포함됩니다.이온전달 크로마토그래피 컬럼을 통과하면 이온전달물질과 반대 전하를 띤 단백질이 이온전달물질에 흡착된 후,단백질pH 또는 이온 강도를 변경하면 용출됩니다.

7.친화성 크로마토그래피:

친화성 크로마토그래피는 단백질을 분리하는 데 매우 유용한 방법입니다.순도가 높은 지저분한 단백질 혼합물에서 정제할 특정 단백질을 분리하는 데는 종종 한 단계만 필요합니다.

이 방법은 리간드(리간드)라고 불리는 다른 분자에 대한 특정 단백질의 공유결합이 아닌 특이적 결합에 기반을 두고 있습니다.

기본 원칙:

단백질은 조직이나 세포에 지저분한 혼합물로 존재하며, 각 세포 유형에는 수천 개의 서로 다른 단백질이 포함되어 있습니다.그러므로 단백질 간의 구별은 생화학의 중요한 부분이며, 단독으로 있었던 것은 아닙니다.또는 이미 만들어진 일련의 방법을 사용하면 지저분한 혼합 단백질에서 어떤 종류의 단백질이라도 제거할 수 있으므로 여러 가지 방법을 조합하여 사용하는 경우가 많습니다.