ការបំបែក និងការបន្សុតប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយក្នុងការស្រាវជ្រាវ និងការអនុវត្តជីវគីមី ហើយជាជំនាញប្រតិបត្តិការដ៏សំខាន់។កោសិកា eukaryotic ធម្មតាអាចផ្ទុកប្រូតេអ៊ីនខុសៗគ្នារាប់ពាន់ ដែលខ្លះសម្បូរណាស់ ហើយខ្លះមានតែពីរបីច្បាប់ប៉ុណ្ណោះ។ដើម្បីសិក្សាជាក់លាក់ប្រូតេអ៊ីនជាដំបូង វាចាំបាច់ក្នុងការបន្សុទ្ធប្រូតេអ៊ីនពីប្រូតេអ៊ីន និងម៉ូលេគុលដែលមិនមែនជាប្រូតេអ៊ីនផ្សេងទៀត។
1. វិធីសាស្រ្តអំបិលចេញនៃប្រូតេអ៊ីន:
អំបិលអព្យាក្រឹតមានឥទ្ធិពលយ៉ាងសំខាន់លើការរលាយនៃប្រូតេអ៊ីន។ជាទូទៅជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃកំហាប់អំបិលក្រោមកំហាប់អំបិលទាប ភាពរលាយនៃប្រូតេអ៊ីនកើនឡើង។នេះត្រូវបានគេហៅថា salting;នៅពេលដែលកំហាប់អំបិលបន្តកើនឡើង ភាពរលាយនៃប្រូតេអ៊ីនថយចុះដល់កម្រិតផ្សេងៗគ្នា ហើយបំបែកចេញពីគ្នាទៅវិញទៅមក។បាតុភូតនេះត្រូវបានគេហៅថា salting out ។
2. វិធីសាស្រ្តជង់ចំណុច Isoelectric៖
ការច្រានចោលអេឡិចត្រូស្ទិចរវាងភាគល្អិតគឺតូចបំផុតនៅពេលដែលប្រូតេអ៊ីនឋិតិវន្ត ដូច្នេះភាពរលាយក៏តូចបំផុតដែរ។ចំនុច isoelectric នៃប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗគឺខុសគ្នា។pH នៃដំណោះស្រាយម៉ាស៊ីនអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីឈានដល់ចំណុច isoelectric នៃប្រូតេអ៊ីនមួយដែលធ្វើឱ្យវាកកកុញ ប៉ុន្តែវិធីសាស្ត្រនេះកម្រត្រូវបានគេប្រើតែម្នាក់ឯងហើយអាចត្រូវបានរួមបញ្ចូលជាមួយនឹងវិធីសាស្រ្ដចេញអំបិល។
3. ការលាងឈាម និងអ៊ុលត្រាសោនៈ
ការលាងឈាមប្រើភ្នាសពាក់កណ្តាល permeable ដើម្បីបំបែកប្រូតេអ៊ីនដែលមានទំហំម៉ូលេគុលខុសៗគ្នា។វិធីសាស្ត្រ ultrafiltration ប្រើសម្ពាធខ្ពស់ ឬកម្លាំង centrifugal ដើម្បីធ្វើឱ្យទឹក និងម៉ូលេគុលរលាយតូចៗផ្សេងទៀតឆ្លងកាត់ភ្នាសពាក់កណ្តាល permeable ខណៈដែលប្រូតេអ៊ីននៅសល់នៅលើភ្នាស។អ្នកអាចជ្រើសរើសទំហំរន្ធញើសខុសៗគ្នា ដើម្បីស្ទាក់ចាប់ប្រូតេអ៊ីនដែលមានទម្ងន់ម៉ូលេគុលខុសៗគ្នា។
4. វិធីសាស្ត្រចម្រោះជែល៖
គេហៅផងដែរថា chromatography មិនរាប់បញ្ចូលទំហំ ឬម៉ូលេគុល sieve chromatography នេះគឺជាវិធីសាស្រ្តដ៏មានប្រយោជន៍បំផុតមួយសម្រាប់ការបំបែកល្បាយប្រូតេអ៊ីនទៅតាមទំហំម៉ូលេគុល។សមា្ភារៈវេចខ្ចប់ដែលប្រើញឹកញាប់ជាងនៅក្នុងជួរឈរគឺជែលគ្លុយកូស (Sephadex ged) និងជែល agarose (ជែល agarose) ។
5. Electrophoresis:
នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ pH ដូចគ្នា ប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗអាចត្រូវបានបំបែកចេញពីគ្នាដោយសារតែទម្ងន់ម៉ូលេគុលផ្សេងគ្នា និងបន្ទុកផ្សេងគ្នានៅក្នុងវាលអគ្គិសនី។វាគួរអោយយកចិត្តទុកដាក់ចំពោះសំណុំ isoelectric electrophoresis ដែលប្រើ ampholyte ជាក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូន។កំឡុងពេល electrophoresis អំពែរបង្កើតជាជម្រាល pH ត្រូវបានបន្ថែមបន្តិចម្តងៗពីអេឡិចត្រូតវិជ្ជមានទៅអេឡិចត្រូតអវិជ្ជមាន។នៅពេលដែលប្រូតេអ៊ីនដែលមានបន្ទុកជាក់លាក់មួយហែលនៅក្នុងវា វានឹងទៅដល់គ្នាទៅវិញទៅមក។ទីតាំង pH នៃចំណុចអគ្គិសនីគឺមិនបន្ត ហើយវិធីសាស្ត្រនេះអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីវិភាគ និងរៀបចំប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗ។
6. Ion chromatography ទំនាក់ទំនង៖
ភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនងអ៊ីយ៉ុង រួមមានភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនងស៊ីតូទិក (ដូចជា carboxymethyl cellulose; CM-cellulose) និងភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនង anionic (diethylaminoethyl cellulose)។នៅពេលឆ្លងកាត់ជួរទំនាក់ទំនងអ៊ីយ៉ុងក្រូម៉ាតូក្រាម ប្រូតេអ៊ីនដែលមានបន្ទុកផ្ទុយទៅនឹងភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនងអ៊ីយ៉ុងត្រូវបានស្រូបយកនៅលើភ្នាក់ងារទំនាក់ទំនងអ៊ីយ៉ុង ហើយបន្ទាប់មកស្រូបយក។ប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានបំប្លែងដោយការផ្លាស់ប្តូរ pH ឬកម្លាំងអ៊ីយ៉ុង។
7. Affinity chromatography៖
Affinity chromatography គឺជាវិធីសាស្រ្តដ៏មានប្រយោជន៍បំផុតសម្រាប់ការបំបែកប្រូតេអ៊ីន។ជារឿយៗវាទាមទារតែមួយជំហានប៉ុណ្ណោះ ដើម្បីបំបែកប្រូតេអ៊ីនជាក់លាក់មួយ ដើម្បីបន្សុតចេញពីល្បាយប្រូតេអ៊ីនដែលមានភាពច្របូកច្របល់ជាមួយនឹងភាពបរិសុទ្ធខ្ពស់។
វិធីសាស្រ្តនេះគឺផ្អែកលើភាពជាក់លាក់ជាជាងការចង covalent នៃប្រូតេអ៊ីនជាក់លាក់ទៅនឹងម៉ូលេគុលមួយទៀតហៅថា ligand (Ligand)។
គោលការណ៍ជាមូលដ្ឋាន៖
ប្រូតេអ៊ីនមាននៅក្នុងល្បាយដែលរញ៉េរញ៉ៃនៅក្នុងជាលិកា ឬកោសិកា ហើយប្រភេទកោសិកានីមួយៗមានប្រូតេអ៊ីនខុសៗគ្នារាប់ពាន់។ដូច្នេះភាពខុសគ្នារវាងប្រូតេអ៊ីនគឺជាផ្នែកសំខាន់មួយនៃជីវគីមីហើយវាមិនមានតែម្នាក់ឯងទេ។ឬសំណុំនៃវិធីសាស្រ្តដែលត្រៀមរួចជាស្រេចអាចដកប្រូតេអ៊ីនប្រភេទណាមួយចេញពីប្រូតេអ៊ីនចម្រុះដែលរញ៉េរញ៉ៃ ដូច្នេះវិធីសាស្រ្តជាច្រើនត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ក្នុងការបញ្ចូលគ្នា។
ពេលវេលាផ្សាយ៖ ០៥-វិច្ឆិកា-២០២០