Separation och rening av proteiner används i stor utsträckning inom biokemiforskning och tillämpning och är en viktig operativ färdighet.En typisk eukaryot cell kan innehålla tusentals olika proteiner, vissa är mycket rika och vissa innehåller bara några få exemplar.För att studera en vissprotein, är det nödvändigt att först rena proteinet från andra proteiner och icke-proteinmolekyler.

1. Utsaltningsmetod avprotein:

Neutralt salt har en betydande effekt på proteinets löslighet.I allmänhet, med ökningen av saltkoncentrationen under låg saltkoncentration, ökar proteinets löslighet.Detta kallas saltning;när saltkoncentrationen fortsätter att öka, minskar proteinets löslighet i varierande grad och separeras ut efter varandra.Detta fenomen kallas utsaltning.

2. Staplingsmetod för isoelektrisk punkt:

Den elektrostatiska repulsionen mellan partiklar är minst när proteinet är statiskt, så lösligheten är också som minst.De isoelektriska punkterna för olika proteiner är olika.Konditioneringslösningens pH kan användas för att nå den isoelektriska punkten för ett protein Få det att ackumuleras, men denna metod används sällan ensam och kan kombineras med utsaltningmetoden.

3. Dialys och ultrafiltrering:

Dialys använder ett semipermeabelt membran för att separera proteiner av olika molekylstorlekar.Ultrafiltreringsmetoden använder högtryck eller centrifugalkraft för att få vatten och andra små lösta molekyler att passera genom ett semipermeabelt membran, medanproteinfinns kvar på membranet.Du kan välja olika porstorlekar för att fånga upp proteiner med olika molekylvikter.

4. Gelfiltreringsmetod:

Kallas även storleksexklusionskromatografi eller molekylsiktskromatografi, detta är en av de mest användbara metoderna för att separera proteinblandningar efter molekylstorlek.De vanligare förpackningsmaterialen i kolonnen är glukosgel (Sephadex ged) och agarosgel (agarosgel).

5. Elektrofores:

Under samma pH-förhållande kan olika proteiner separeras på grund av deras olika molekylvikter och olika laddningar i det elektriska fältet.Det är värt att uppmärksamma isoelektrisk uppsättningselektrofores, som använder en amfolyt som bärare.Under elektrofores bildar amfolyten en pH-gradient som gradvis adderas från den positiva elektroden till den negativa elektroden.När proteinet med en viss laddning simmar i det kommer det att nå varandra.Den elektriska punktens pH-position är diskontinuerlig, och denna metod kan användas för att analysera och förbereda olika proteiner.

6. Jonkommunikationskromatografi:

jonkommunikationsmedel inkluderar katjoniska kommunikationsmedel (såsom karboximetylcellulosa; CM-cellulosa) och anjoniska kommunikationsmedel (dietylaminoetylcellulosa).När det passerar genom jonkommunikationskromatografikolonnen, adsorberas proteinet med motsatt laddning till jonkommunikationsmedlet på jonkommunikationsmedlet och sedan det adsorberadeproteinelueras genom att ändra pH eller jonstyrka.

7. Affinitetskromatografi:

Affinitetskromatografi är en extremt användbar metod för att separera proteiner.Det krävs ofta bara ett steg för att separera ett visst protein som ska renas från en rörig proteinblandning med hög renhet.

Denna metod är baserad på den specifika snarare än kovalenta bindningen av vissa proteiner till en annan molekyl som kallas en ligand (ligand).

Grundprincipen:

proteiner finns i en rörig blandning i vävnader eller celler, och varje typ av cell innehåller tusentals olika proteiner.Därför är skillnaden mellan proteiner en viktig del av biokemin, och den har inte varit ensam.Eller en uppsättning färdiga metoder kan ta bort alla typer av protein från ett rörigt blandat protein, så flera metoder används ofta i kombination.