Սպիտակուցների տարանջատումը և մաքրումը լայնորեն օգտագործվում է կենսաքիմիայի հետազոտության և կիրառման մեջ և հանդիսանում է կարևոր գործառնական հմտություն:Տիպիկ էուկարիոտ բջիջը կարող է պարունակել հազարավոր տարբեր սպիտակուցներ, որոնցից ոմանք շատ հարուստ են, իսկ ոմանք պարունակում են ընդամենը մի քանի օրինակ:Որպեսզի ուսումնասիրեն որոշակիսպիտակուցը, անհրաժեշտ է նախ սպիտակուցը մաքրել այլ սպիտակուցներից և ոչ սպիտակուցային մոլեկուլներից։

1. Salting-out մեթոդըսպիտակուցը:

Չեզոք աղը զգալի ազդեցություն ունի սպիտակուցի լուծելիության վրա։Ընդհանրապես, աղի ցածր կոնցենտրացիայի դեպքում աղի կոնցենտրացիայի բարձրացմամբ, սպիտակուցի լուծելիությունը մեծանում է:Սա կոչվում է աղակալում;երբ աղի կոնցենտրացիան շարունակում է աճել, սպիտակուցի լուծելիությունը նվազում է տարբեր աստիճաններով և բաժանվում մեկը մյուսի հետևից:Այս երեւույթը կոչվում է աղակալում:

2. Իզոէլեկտրական կետի կուտակման մեթոդ.

Մասնիկների միջև էլեկտրաստատիկ վանումն ամենափոքրն է, երբ սպիտակուցը ստատիկ է, ուստի լուծելիությունը նույնպես ամենափոքրն է։Տարբեր սպիտակուցների իզոէլեկտրական կետերը տարբեր են։Կոնդիցիոներ լուծույթի pH-ը կարող է օգտագործվել սպիտակուցի իզոէլեկտրական կետին հասնելու համար, որպեսզի այն կուտակվի, սակայն այս մեթոդը հազվադեպ է օգտագործվում միայնակ և կարող է զուգակցվել աղակալման մեթոդի հետ:

3. Դիալիզ և ուլտրաֆիլտրացիա.

Դիալիզի միջոցով օգտագործվում է կիսաթափանցիկ թաղանթ՝ տարբեր մոլեկուլային չափերի սպիտակուցներ առանձնացնելու համար:Ուլտրաֆիլտրման մեթոդը օգտագործում է բարձր ճնշում կամ կենտրոնախույս ուժ, որպեսզի ջուրը և լուծված այլ փոքր մոլեկուլները անցնեն կիսաթափանցիկ թաղանթով, մինչդեռսպիտակուցըմնում է թաղանթի վրա:Դուք կարող եք ընտրել տարբեր ծակոտիների չափսեր՝ տարբեր մոլեկուլային քաշի սպիտակուցներ հայտնաբերելու համար:

4. Գել ֆիլտրման մեթոդ:

Նաև կոչվում է չափի բացառման քրոմատոգրաֆիա կամ մոլեկուլային մաղի քրոմատոգրաֆիա, սա սպիտակուցային խառնուրդներն ըստ մոլեկուլային չափի առանձնացնելու ամենաօգտակար մեթոդներից մեկն է։Սյունակում առավել հաճախ օգտագործվող փաթեթավորման նյութերն են գլյուկոզայի գելը (Sephadex ged) և ագարոզայի գելը (ագարոզա գել):

5.Էլեկտրոֆորեզ.

Նույն pH-ի պայմաններում տարբեր սպիտակուցներ կարող են առանձնացվել իրենց տարբեր մոլեկուլային քաշի և էլեկտրական դաշտում տարբեր լիցքերի պատճառով:Արժե ուշադրություն դարձնել isoelectric set էլեկտրոֆորեզին, որն օգտագործում է ամֆոլիտ որպես կրող:Էլեկտրոֆորեզի ժամանակ ամֆոլիտը ձևավորում է pH գրադիենտ, որն աստիճանաբար ավելացվում է դրական էլեկտրոդից դեպի բացասական էլեկտրոդ:Երբ որոշակի լիցք ունեցող սպիտակուցը լողում է դրա մեջ, այն կհասնի միմյանց։Էլեկտրական կետի pH դիրքը դադարում է, և այս մեթոդը կարող է օգտագործվել տարբեր սպիտակուցներ վերլուծելու և պատրաստելու համար:

6.Ion կապի քրոմատոգրաֆիա:

Իոնային հաղորդակցման միջոցները ներառում են կատիոնային հաղորդակցման նյութեր (օրինակ՝ կարբոքսիմեթիլ ցելյուլոզա, CM-ցելյուլոզա) և անիոնային հաղորդակցման նյութեր (դիէթիլամինոէթիլ ցելյուլոզա):Իոնային հաղորդակցության քրոմատոգրաֆիայի սյունակով անցնելիս իոնային հաղորդակցման նյութին հակառակ լիցք ունեցող սպիտակուցը ներծծվում է իոնային հաղորդակցման նյութի վրա, այնուհետև ներծծվում է.սպիտակուցըզտվում է pH-ի կամ իոնային ուժի փոփոխությամբ:

7. Affinity chromatography:

Հարաբերական քրոմատոգրաֆիան չափազանց օգտակար մեթոդ է սպիտակուցների տարանջատման համար:Հաճախ միայն մեկ քայլ է պահանջվում որոշակի սպիտակուցը մաքրելու համար բարձր մաքրությամբ խառնաշփոթ սպիտակուցային խառնուրդից առանձնացնելու համար:

Այս մեթոդը հիմնված է որոշակի սպիտակուցների, այլ ոչ թե կովալենտային կապի վրա, այլ մոլեկուլի, որը կոչվում է լիգանդ (Լիգանդ):

Հիմնական սկզբունքը.

սպիտակուցները գոյություն ունեն հյուսվածքներում կամ բջիջներում խառնաշփոթ խառնուրդով, և բջիջների յուրաքանչյուր տեսակ պարունակում է հազարավոր տարբեր սպիտակուցներ:Հետևաբար, սպիտակուցների միջև տարբերությունը կենսաքիմիայի կարևոր մասն է, և դա միայնակ չի եղել:Կամ մի շարք պատրաստի մեթոդներ կարող են հեռացնել ցանկացած տեսակի սպիտակուցը խառնաշփոթ սպիտակուցից, ուստի մի քանի մեթոդներ հաճախ օգտագործվում են համակցված: