Pemisahan lan pemurnian protein akeh digunakake ing riset lan aplikasi biokimia lan minangka katrampilan operasional sing penting.Sel eukariotik sing khas bisa ngemot ewonan protein sing beda-beda, ana sing sugih banget lan sawetara mung ngemot sawetara salinan.Kanggo sinau tartamtuprotein, perlu kanggo ngresiki protein saka protein liyane lan molekul non-protein.

1. Metode Salting-out sakaprotein:

Garam netral duweni pengaruh sing signifikan marang kelarutan protein.Umumé, kanthi nambah konsentrasi uyah ing konsentrasi uyah sing kurang, kelarutan protein mundhak.Iki diarani salting;nalika konsentrasi uyah terus kanggo nambah, The solubility protein sudo kanggo werna-werna derajat lan misahake metu siji sawise liyane.Fenomena iki diarani salting out.

2. Metode stacking titik isoelektrik:

Tolak elektrostatik ing antarane partikel paling cilik nalika protein statis, saengga kelarutan uga paling cilik.Titik isoelektrik saka macem-macem protein beda-beda.pH saka solusi kahanan bisa digunakake kanggo nggayuh titik isoelektrik saka protein.

3. Dialisis lan ultrafiltrasi:

Dialisis nggunakake membran semi-permeabel kanggo misahake protein kanthi ukuran molekul sing beda.Cara ultrafiltrasi nggunakake tekanan dhuwur utawa gaya sentrifugal kanggo nggawe banyu lan molekul solute cilik liyane ngliwati membran semi-permeabel, nalikaproteintetep ing membran.Sampeyan bisa milih ukuran pori sing beda kanggo nyegat protein kanthi bobot molekul sing beda.

4. Metode filtrasi gel:

Uga disebut kromatografi pengecualian ukuran utawa kromatografi sieve molekul, iki minangka salah sawijining cara sing paling migunani kanggo misahake campuran protein miturut ukuran molekul.Bahan pengepakan sing luwih umum digunakake ing kolom yaiku gel glukosa (Sephadex ged) lan gel agarose (gel agarose).

5. Elektroforesis:

Ing kondisi pH sing padha, macem-macem protein bisa dipisahake amarga bobot molekul sing beda lan biaya sing beda ing medan listrik.Perlu diwenehi perhatian marang elektroforesis set isoelektrik, sing nggunakake ampholyte minangka operator.Sajrone elektroforesis, amfolit mbentuk gradien pH kanthi bertahap ditambahake saka elektroda positif menyang elektroda negatif.Nalika protein kanthi muatan tartamtu nglangi, bakal tekan saben liyane.Posisi pH titik listrik ora terus-terusan, lan cara iki bisa digunakake kanggo nganalisa lan nyiapake macem-macem protein.

6. Kromatografi komunikasi ion:

agen komunikasi ion kalebu agen komunikasi kationik (kayata carboxymethyl cellulose; CM-selulosa) lan agen komunikasi anionik (diethylaminoethyl cellulose).Nalika ngliwati kolom kromatografi komunikasi ion, protein kanthi muatan ngelawan karo agen komunikasi ion diserap ing agen komunikasi ion, lan banjur diserap.proteindiencerake kanthi ngganti pH utawa kekuatan ion.

7. Kromatografi afinitas:

Kromatografi afinitas minangka cara sing migunani banget kanggo misahake protein.Asring mbutuhake mung siji langkah kanggo misahake protein tartamtu kanggo diresiki saka campuran protein sing ora apik kanthi kemurnian dhuwur.

Cara iki adhedhasar ikatan spesifik tinimbang kovalen saka protèin tartamtu menyang molekul liya sing disebut ligan (Ligand).

Prinsip dhasar:

protein ana ing campuran tumoto ing jaringan utawa sel, lan saben jinis sel ngandhut ewu protein beda.Mulane, bedane antarane protèin minangka bagéyan penting saka biokimia, lan ora mung.Utawa sakumpulan cara sing wis siap bisa ngilangi protein apa wae saka protein campuran sing ora apik, mula sawetara cara asring digunakake ing kombinasi.