Падзел і ачыстка бялкоў шырока выкарыстоўваецца ў біяхімічных даследаваннях і прымяненні і з'яўляецца важным працоўным навыкам.Тыповая эукарыятычная клетка можа ўтрымліваць тысячы розных бялкоў, некаторыя з іх вельмі багатыя, а некаторыя ўтрымліваюць толькі некалькі копій.Для таго, каб вывучыць пэўныбялок, неабходна спачатку ачысціць бялок ад іншых бялкоў і небелковых малекул.

1. Спосаб высолкібялок:

Значны ўплыў на растваральнасць бялку аказвае нейтральная соль.Як правіла, з павелічэннем канцэнтрацыі солі пры нізкай канцэнтрацыі солі павялічваецца растваральнасць бялку.Гэта называецца засолка;калі канцэнтрацыя солі працягвае павялічвацца, растваральнасць бялку ў рознай ступені памяншаецца і аддзяляецца адзін за адным.Гэта з'ява называецца высаливанием.

2. Метад накладання ізаэлектрычных кропак:

Электрастатычнае адштурхванне паміж часціцамі найменшае, калі бялок статычны, таму і растваральнасць таксама найменшая.Ізаэлектрычныя кропкі розных бялкоў розныя.pH раствора для кандыцыянавання можна выкарыстоўваць для дасягнення ізаэлектрычнай кропкі бялку, каб ён назапашваўся, але гэты метад рэдка выкарыстоўваецца асобна і можа спалучацца з метадам высаливания.

3. Дыяліз і ультрафільтрація:

Дыяліз выкарыстоўвае напаўпранікальную мембрану для падзелу бялкоў рознага малекулярнага памеру.Метад ультрафільтрацыі выкарыстоўвае высокі ціск або цэнтрабежную сілу, каб вада і іншыя малыя малекулы растворанага рэчыва праходзілі праз напаўпранікальную мембрану, у той час якбялокзастаецца на мембране.Вы можаце выбраць розныя памеры пор для перахопу бялкоў рознай малекулярнай масы.

4.Метад гель-фільтрацыі:

Таксама называецца храматаграфіяй выключэння па памеры або малекулярна-сітавай храматаграфіяй, гэта адзін з найбольш карысных метадаў падзелу бялковых сумесяў у залежнасці ад малекулярнага памеру.Найбольш часта выкарыстоўваюцца ўпаковачныя матэрыялы ў калонцы - гэта гель глюкозы (Sephadex Ged) і агарозный гель (агарозный гель).

5. Электрафарэз:

Пры аднолькавых умовах pH розныя вавёркі могуць быць падзеленыя з-за іх рознай малекулярнай масы і розных зарадаў у электрычным полі.Варта звярнуць увагу на электрафарэз з изоэлектрическим наборам, пры якім у якасці носьбіта выкарыстоўваецца амфолит.Падчас электрафарэзу амфаліт утварае градыент pH, які паступова дадаецца ад станоўчага электрода да адмоўнага.Калі бялок з пэўным зарадам паплыве ў ім, яны дацягнуцца адзін да аднаго.Становішча pH электрычнай кропкі з'яўляецца перарывістым, і гэты метад можна выкарыстоўваць для аналізу і падрыхтоўкі розных бялкоў.

6. Іённая камунікацыйная храматаграфія:

агенты іённай сувязі ўключаюць катыённыя агенты сувязі (такія як карбоксиметилцеллюлоза; CM-цэлюлоза) і аніённыя агенты сувязі (диэтиламиноэтилцеллюлоза).Пры праходжанні праз іонна-камунікацыйную храматаграфічную калонку бялок з процілеглым зарадам да іённага камунікацыйнага агента адсарбуецца на іённа-камунікацыйным агенте, а затым адсарбуеццабялокэлюируется шляхам змены pH або іённай сілы.

7.Аффинная храматаграфія:

Афінная храматаграфія - надзвычай карысны метад падзелу бялкоў.Часта патрабуецца толькі адзін крок, каб аддзяліць пэўны бялок, які трэба ачысціць ад бязладнай бялковай сумесі высокай чысціні.

Гэты метад заснаваны на спецыфічным, а не кавалентным звязванні пэўных бялкоў з іншай малекулай, званай лигандом (Ligand).

Асноўны прынцып:

бялкі існуюць у бруднай сумесі ў тканінах або клетках, і кожны тып клетак змяшчае тысячы розных бялкоў.Такім чынам, адрозненне паміж вавёркамі з'яўляецца важнай часткай біяхіміі, і гэта не было адзінокім.Або набор гатовых метадаў можа выдаліць любы від бялку з бруднай бялковай сумесі, таму некалькі метадаў часта выкарыстоўваюцца ў камбінацыі.