Quin és el mètode de purificació delsistema de purificació de proteïnes?Cal conèixer la seqüència d'ADN codificant de la proteïna purificada, veure quines cèl·lules o teixits estan sobreexpressats en el gen diana i dissenyar cebadors gènics per amplificar l'arf del fragment d'ADN diana.Aquesta és l'anomenada adquisició de fragments de gens diana.

Construcció del vector d'expressió: En el vector d'expressió procariota o eucariota amb les característiques de la pròpia expressió gènica obtinguda, el principal problema d'aquest pas és construir el plasmidi i el gen d'interès, i el sistema d'expressió.El temps d'expressió procariota és curt, el cost és baix i una gran quantitat d'expressió és una prioritat;el gen no s'expressa a E. coli, i el problema es produeix en l'optimització de codons.Tenint en compte una millor activitat i purificació de la proteïna, els investigadors van optar per expressar-se en llevat Pichi.L'expressió reeixida de l'optimització de codons és important.

Quin és el mètode de purificació del sistema de purificació de proteïnes:

1. Precipitacions.

2. Electroforesi: Una proteïna carregada és més alta o més baixa que el seu punt isoelèctric i es pot traslladar a l'elèctrode negatiu o a l'elèctrode positiu del camp elèctric en el camp elèctric.Suport d'electroforesi de pel·lícula, electroforesi, etc.

3. Diàlisi: mètode que utilitza dues bosses de diàlisi per separar molècules grans de proteïnes i compostos orgànics moleculars petits.

4. Cromatografia: La cromatografia d'intercanvi iònic utilitza les propietats lliures de les proteïnes.Sota un pH específic, les càrregues i propietats de les proteïnes són diferents i es poden separar mitjançant cromatografia d'intercanvi iònic.En la cromatografia d'intercanvi aniònic, primer s'elueixen les proteïnes amb baix poder negatiu.Tamisos moleculars, també coneguts com a filtració en gel.Les proteïnes petites entren als porus i hi romanen durant molt de temps.Les proteïnes grans no poden entrar als porus i sortir directament.

5. Quin és el mètode de purificació delsistema de purificació de proteïnes?Ultracentrifugació: la purificació de proteïnes es pot utilitzar per determinar el pes molecular i es pot utilitzar com a proteïna.Es separa la formació de proteïnes amb diferents densitats.