Was ist die Reinigungsmethode?Proteinreinigungssystem?Es ist notwendig, die kodierende DNA-Sequenz des gereinigten Proteins zu kennen, um zu sehen, welche Zellen oder Gewebe im Zielgen überexprimiert werden, und um Genprimer zu entwerfen, um den Arf des Ziel-DNA-Fragments zu verstärken.Hierbei handelt es sich um den sogenannten Erwerb von Zielgenfragmenten.

Konstruktion des Expressionsvektors: Im prokaryotischen oder eukaryotischen Expressionsvektor mit den Eigenschaften der erhaltenen Genexpression selbst besteht das Hauptproblem dieses Schrittes darin, das Plasmid und das interessierende Gen sowie das Expressionssystem zu konstruieren.Die prokaryotische Expressionszeit ist kurz, die Kosten niedrig und eine große Expressionsmenge hat Priorität;Das Gen wird in E. coli nicht exprimiert und das Problem tritt bei der Codon-Optimierung auf.Im Hinblick auf eine bessere Aktivität und Reinigung des Proteins entschieden sich die Forscher für die Expression in Pichi-Hefe.Der erfolgreiche Ausdruck der Codon-Optimierung ist wichtig.

Was ist die Reinigungsmethode des Proteinreinigungssystems:

1. Niederschlag.

2. Elektrophorese: Ein geladenes Protein liegt über oder unter seinem isoelektrischen Punkt und kann im elektrischen Feld zur negativen oder positiven Elektrode des elektrischen Feldes bewegt werden.Unterstützen Sie Filmelektrophorese, Elektrophorese usw.

3. Dialyse: Eine Methode, bei der zwei Dialysebeutel verwendet werden, um große Moleküle von Proteinen und kleinen molekularen organischen Verbindungen zu trennen.

4. Chromatographie: Die Ionenaustauschchromatographie nutzt die freien Eigenschaften von Proteinen.Unter einem bestimmten pH-Wert sind die Ladungen und Eigenschaften von Proteinen unterschiedlich und können durch Ionenaustauschchromatographie getrennt werden.Bei der Anionenaustauschchromatographie werden zunächst Proteine ​​mit geringer negativer Leistung eluiert.Molekularsiebe, auch Gelfiltration genannt.Kleine Proteine ​​dringen in die Poren ein und bleiben dort lange.Große Proteine ​​können nicht in die Poren eindringen und direkt abfließen.

5. Was ist die Reinigungsmethode?Proteinreinigungssystem?Ultrazentrifugation: Die Proteinreinigung kann zur Bestimmung des Molekulargewichts verwendet und als Protein verwendet werden.Die Bildung von Proteinen unterschiedlicher Dichte wird getrennt.