Mis on puhastusmeetodvalgu puhastamise süsteem?On vaja teada puhastatud valgu kodeerivat DNA järjestust, näha, millised rakud või koed on sihtgeenis üleekspresseeritud, ning kavandada geenipraimerid sihtmärk-DNA fragmendi arf-i amplifitseerimiseks.See on nn sihtgeeni fragmentide omandamine.

Ekspressioonivektori konstrueerimine: Prokarüootses või eukarüootses ekspressioonivektoris, millel on saadud geeniekspressiooni enda omadused, on selle etapi põhiprobleemiks huvipakkuva plasmiidi ja geeni ning ekspressioonisüsteemi konstrueerimine.Prokarüootse ekspressiooni aeg on lühike, maksumus on madal ja suur hulk ekspressiooni on prioriteet;geen ei ekspresseeru E. coli-s ja probleem ilmneb koodonite optimeerimisel.Arvestades valgu paremat aktiivsust ja puhastamist, otsustasid teadlased ekspresseerida Pichi pärmis.Koodoni optimeerimise edukas ekspressioon on oluline.

Mis on valgu puhastussüsteemi puhastusmeetod:

1. Sademed.

2. Elektroforees: Laetud valk on kõrgem või madalam kui tema isoelektriline punkt ja seda saab liigutada negatiivse elektroodi või elektrivälja positiivse elektroodi külge.Tugikile elektroforees, elektroforees jne.

3. Dialüüs: meetod, mis kasutab kahte dialüüsikotti suurte molekulide eraldamiseks valkudest ja väikestest molekulaarsetest orgaanilistest ühenditest.

4. Kromatograafia: ioonivahetuskromatograafias kasutatakse valkude vabu omadusi.Konkreetse pH korral on valkude laengud ja omadused erinevad ning neid saab eraldada ioonvahetuskromatograafia abil.Anioonivahetuskromatograafias elueeritakse esmalt madala negatiivse võimsusega valgud.Molekulaarsõelad, tuntud ka kui geelfiltreerimine.Väikesed valgud sisenevad pooridesse ja püsivad neis pikka aega.Suured valgud ei saa siseneda pooridesse ja otse välja voolata.

5. Mis on puhastusmeetodvalgu puhastamise süsteem?Ultratsentrifuugimine: valgu puhastamist saab kasutada molekulmassi määramiseks ja seda saab kasutada valguna.Eraldatakse erineva tihedusega valkude moodustumine.