מהי שיטת הטיהור של המערכת לטיהור חלבון?יש צורך לדעת את רצף ה-DNA המקודד של החלבון המטוהר, לראות אילו תאים או רקמות מתבטאים יתר על המידה בגן המטרה, ולתכנן פריימרים גנים להגברת ה-arf של קטע ה-DNA המטרה.זוהי מה שנקרא רכישה של שברי גן מטרה.

בניית וקטור הביטוי: בוקטור הביטוי הפרוקריוטי או האוקריוטי בעל המאפיינים של ביטוי הגנים המתקבל עצמו, הבעיה העיקרית של שלב זה היא בניית הפלסמיד והגן המעניין, ומערכת הביטוי.זמן הביטוי הפרוקריוטי קצר, העלות נמוכה, וכמות גדולה של ביטוי היא בעדיפות;הגן אינו מתבטא ב-E. coli, והבעיה מתרחשת באופטימיזציה של קודונים.בהתחשב בפעילות טובה יותר וטיהור החלבון, בחרו החוקרים לבטא בשמרי פיצ'י.ביטוי מוצלח של אופטימיזציה של קודונים חשוב.

מהי שיטת הטיהור של מערכת טיהור החלבון:

1. משקעים.

2. אלקטרופורזה: חלבון טעון גבוה או נמוך מהנקודה האיזואלקטרית שלו וניתן להעביר אותו אל האלקטרודה השלילית או אל האלקטרודה החיובית של השדה החשמלי בשדה החשמלי.תמיכה באלקטרופורזה של סרט, אלקטרופורזה וכו '.

3. דיאליזה: שיטה המשתמשת בשתי שקיות דיאליזה להפרדה בין מולקולות גדולות מחלבונים ותרכובות אורגניות מולקולריות קטנות.

4. כרומטוגרפיה: כרומטוגרפיה של חילופי יונים משתמשת בתכונות החופשיות של חלבונים.תחת pH ספציפי, המטענים והמאפיינים של חלבונים שונים, וניתן להפריד ביניהם על ידי כרומטוגרפיה של חילופי יונים.בכרומטוגרפיה של חילופי אניונים, חלבונים בעלי כוח שלילי נמוך נפלטים תחילה.מסננות מולקולריות, הידועות גם בשם סינון ג'ל.חלבונים קטנים נכנסים לנקבוביות ונשארים בהן לאורך זמן.חלבונים גדולים לא יכולים להיכנס לנקבוביות ולזרום החוצה ישירות.

5. מהי שיטת הטיהור של המערכת לטיהור חלבון?Ultracentrifugation: ניתן להשתמש בטיהור חלבון כדי לקבוע את המשקל המולקולרי והוא יכול לשמש כחלבון.היווצרות של חלבונים עם צפיפות שונה מופרדת.