Cal é o método de purificación dosistema de purificación de proteínas?É necesario coñecer a secuencia de ADN codificante da proteína purificada, ver que células ou tecidos están sobreexpresados ​​no xene diana e deseñar cebadores xenéticos para amplificar o arf do fragmento de ADN diana.Esta é a chamada adquisición de fragmentos de xenes diana.

Construción do vector de expresión: No vector de expresión procariota ou eucariota coas características da propia expresión xénica obtida, o principal problema deste paso é construír o plásmido e o xene de interese, e o sistema de expresión.O tempo de expresión procariota é curto, o custo é baixo e unha gran cantidade de expresión é unha prioridade;o xene non se expresa en E. coli, e o problema prodúcese na optimización de codóns.En consideración á mellor actividade e purificación da proteína, os investigadores optaron por expresala en levadura Pichi.É importante a expresión exitosa da optimización de codóns.

Cal é o método de purificación do sistema de purificación de proteínas:

1. Precipitacións.

2. Electroforese: unha proteína cargada é máis alta ou máis baixa que o seu punto isoeléctrico e pódese mover ao electrodo negativo ou ao electrodo positivo do campo eléctrico no campo eléctrico.Soporte de electroforese de película, electroforese, etc.

3. Diálise: método que utiliza dúas bolsas de diálise para separar moléculas grandes de proteínas e compostos orgánicos moleculares pequenos.

4. Cromatografía: a cromatografía de intercambio iónico utiliza as propiedades libres das proteínas.Baixo un pH específico, as cargas e propiedades das proteínas son diferentes e pódense separar mediante cromatografía de intercambio iónico.Na cromatografía de intercambio aniónico, as proteínas con baixo poder negativo elúense primeiro.Peneiras moleculares, tamén coñecidas como filtración en xel.As pequenas proteínas entran nos poros e permanecen neles durante moito tempo.As proteínas grandes non poden entrar nos poros e saír directamente.

5. Cal é o método de purificación dosistema de purificación de proteínas?Ultracentrifugación: a purificación de proteínas pódese usar para determinar o peso molecular e pódese usar como proteína.Sepárase a formación de proteínas con diferentes densidades.