Phương pháp thanh lọc củahệ thống tinh chế protein?Cần phải biết trình tự DNA mã hóa của protein tinh khiết, để xem tế bào hoặc mô nào được biểu hiện quá mức ở gen mục tiêu và thiết kế các đoạn mồi gen để khuếch đại arf của đoạn DNA mục tiêu.Đây được gọi là việc thu thập các đoạn gen mục tiêu.

Xây dựng vectơ biểu hiện: Trong vectơ biểu hiện ở sinh vật nhân sơ hoặc nhân thực có đặc điểm của chính biểu hiện gen thu được, vấn đề chính của bước này là xây dựng plasmid, gen quan tâm và hệ thống biểu hiện.Thời gian biểu hiện của sinh vật nhân sơ ngắn, chi phí thấp và số lượng biểu hiện lớn là ưu tiên hàng đầu;gen này không được biểu hiện ở E. coli và vấn đề xảy ra trong việc tối ưu hóa codon.Để xem xét hoạt động tốt hơn và tinh chế protein, các nhà nghiên cứu đã chọn biểu hiện trong nấm men Pichi.Việc thể hiện thành công việc tối ưu hóa codon là rất quan trọng.

Phương pháp tinh chế của hệ thống tinh chế protein là gì:

1. Lượng mưa.

2. Điện di: Protein tích điện cao hơn hoặc thấp hơn điểm đẳng điện của nó và có thể di chuyển về cực âm hoặc cực dương của điện trường trong điện trường.Hỗ trợ điện di phim, điện di, v.v.

3. Lọc máu: Phương pháp sử dụng hai túi lọc máu để tách các phân tử lớn ra khỏi protein và các hợp chất hữu cơ phân tử nhỏ.

4. Sắc ký: Sắc ký trao đổi ion sử dụng các đặc tính tự do của protein.Dưới một độ pH cụ thể, điện tích và tính chất của protein là khác nhau và chúng có thể được phân tách bằng sắc ký trao đổi ion.Trong sắc ký trao đổi anion, các protein có năng lượng âm thấp sẽ được rửa giải trước tiên.Sàng phân tử hay còn gọi là lọc gel.Các protein nhỏ xâm nhập vào lỗ chân lông và tồn tại trong đó một thời gian dài.Các protein lớn không thể đi vào lỗ chân lông và chảy ra ngoài trực tiếp.

5. Phương pháp thanh lọc củahệ thống tinh chế protein?Siêu ly tâm: Tinh chế protein có thể được sử dụng để xác định trọng lượng phân tử và có thể được sử dụng làm protein.Sự hình thành các protein có mật độ khác nhau được tách ra.