PCR FAQ 1. ਗਲਤ ਨੈਗੇਟਿਵ, ਕੋਈ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਦਿਖਾਈ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦਾ 2. ਗਲਤ ਸਕਾਰਾਤਮਕ 3. ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਹਨ 4. ਫਲੈਕੀ ਡਰੈਗ ਸਟ੍ਰਿਪਸ ਜਾਂ ਸਮੀਅਰ ਸਟ੍ਰਿਪ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਹਨ:

1 ਗਲਤ ਨਕਾਰਾਤਮਕ, ਕੋਈ ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਬੈਂਡ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਮੁੱਖ ਪਹਿਲੂ ਹਨ

① ਟੈਂਪਲੇਟ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਤਿਆਰੀ

② ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗੁਣਵੱਤਾ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ

③ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗੁਣਵੱਤਾ ਅਤੇ

④ ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ।ਕਾਰਨਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਉਪਰੋਕਤ ਲਿੰਕਾਂ 'ਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਖੋਜ ਵੀ ਕੀਤੀ ਜਾਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।

ਟੈਮਪਲੇਟ:

① ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਅਸ਼ੁੱਧ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ

② ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿੱਚ Taq ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ

③ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹਜ਼ਮ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਅਤੇ ਹਟਾਏ ਨਹੀਂ ਜਾਂਦੇ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਕ੍ਰੋਮੋਸੋਮ ਵਿੱਚ ਹਿਸਟੋਨ

④ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਕੱਢਣ ਅਤੇ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਦੌਰਾਨ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਗਾਇਬ ਹੋ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਾਂ ਫਿਨੋਲ ਸਾਹ ਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ

⑤ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਕਾਰ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਚੰਗੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਦਿਖਾਈ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦੇ, ਤਾਂ ਇਹ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੈ ਕਿ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਪਾਚਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਜਾਂ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਕੱਢਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਕੁਝ ਗਲਤ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵੀ ਅਤੇ ਸਥਿਰ ਪਾਚਨ ਹੱਲ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਆਪਣੀ ਮਰਜ਼ੀ ਨਾਲ ਬਦਲਿਆ ਨਹੀਂ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ..ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਇਨਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ: ਨਵੇਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਬਦਲਣਾ, ਜਾਂ ਪੁਰਾਣੇ ਅਤੇ ਨਵੇਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੋਵਾਂ ਦੀ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਇਹ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ ਕਿ ਕੀ ਝੂਠੇ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨੁਕਸਾਨ ਜਾਂ ਨਾਕਾਫ਼ੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹਨ।ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕਈ ਵਾਰ ਟਾਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਭੁੱਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਾਈਮਰ: ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ, ਅਤੇ ਕੀ ਦੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਸਮਮਿਤੀ ਹੈ, ਪੀਸੀਆਰ ਅਸਫਲਤਾ ਜਾਂ ਅਸੰਤੋਸ਼ਜਨਕ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਅਤੇ ਆਸਾਨ ਫੈਲਣ ਦੇ ਆਮ ਕਾਰਨ ਹਨ।ਕੁਝ ਬੈਚਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਿੰਥੇਸਿਸ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਵਿੱਚ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਹਨ।ਦੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਦੂਜੇ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਤਵੱਜੋ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਘੱਟ-ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਅਸਮਿਮਟ੍ਰਿਕ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਵਿਰੋਧੀ ਉਪਾਅ ਹਨ:

① ਇੱਕ ਚੰਗੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਿੰਥੇਸਿਸ ਯੂਨਿਟ ਚੁਣੋ।

② ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਸਿਰਫ਼ OD ਮੁੱਲ 'ਤੇ ਹੀ ਨਹੀਂ ਦੇਖਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਟਾਕ ਹੱਲ ਵੱਲ ਵੀ ਧਿਆਨ ਦੇਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਬੈਂਡ ਹੋਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਦੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਬੈਂਡਾਂ ਦੀ ਚਮਕ ਲਗਭਗ ਇੱਕੋ ਜਿਹੀ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਇੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਬੈਂਡ ਹੈ ਅਤੇ ਦੂਜੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਬੈਂਡ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਪੱਟੀਆਂ ਲਈ, ਪੀਸੀਆਰ ਇਸ ਸਮੇਂ ਅਸਫਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਿੰਥੇਸਿਸ ਯੂਨਿਟ ਨਾਲ ਗੱਲਬਾਤ ਰਾਹੀਂ ਹੱਲ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਇੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਚਮਕ ਹੈ ਅਤੇ ਦੂਜੇ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਚਮਕ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਸੰਤੁਲਿਤ ਕਰੋ।

③ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਫਰਿੱਜ ਵਿੱਚ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਜੰਮਣ ਅਤੇ ਪਿਘਲਣ ਜਾਂ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਉੱਚ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਅਤੇ ਘੱਟ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਖਰਾਬ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਵਿਗੜ ਸਕਦੇ ਹਨ।

④ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਗੈਰ-ਵਾਜਬ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਕਾਫ਼ੀ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਡਾਇਮਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਬਣਦੇ ਹਨ, ਆਦਿ। Mg2+ ਇਕਾਗਰਤਾ: Mg2+ ਆਇਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ PCR ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ 'ਤੇ ਬਹੁਤ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੈ।ਜੇ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਜੇ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਉਪਜ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰੇਗਾ ਅਤੇ ਇੱਥੋਂ ਤੱਕ ਕਿ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਬਿਨਾਂ ਐਂਪਲੀਫਾਈ ਕੀਤੇ ਬੈਂਡਾਂ ਦੇ ਅਸਫਲ ਹੋਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਵੀ ਬਣੇਗਾ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਾਲੀਅਮ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਅ: ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਵਾਲੀਅਮ 20ul, 30ul, ਅਤੇ 50ul ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਜਾਂ 100ul, ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਕਿਹੜੀ ਮਾਤਰਾ ਵਰਤੀ ਜਾਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ ਵਿਗਿਆਨਕ ਖੋਜ ਅਤੇ ਕਲੀਨਿਕਲ ਟੈਸਟਿੰਗ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਵਾਲੀਅਮ ਬਣਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ 20ul, ਅਤੇ ਫਿਰ ਇੱਕ ਵੱਡਾ ਵਾਲੀਅਮ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਤੁਹਾਨੂੰ ਸ਼ਰਤਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਇਹ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਅਸਫਲ ਹੋ ਜਾਵੇਗਾ।ਭੌਤਿਕ ਕਾਰਨ: ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਡੈਨੇਚਰੇਸ਼ਨ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਵਿਕਾਰ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਘੱਟ ਹੈ ਅਤੇ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਸਮਾਂ ਛੋਟਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਝੂਠੇ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਹੋਣ ਦੀ ਬਹੁਤ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ;ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ, ਜੋ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਖਾਸ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਕਈ ਵਾਰ ਐਂਪਲੀਫਾਇਰ ਜਾਂ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਘੜੇ ਵਿੱਚ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ, ਐਨੀਲਿੰਗ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਤਾਪਮਾਨਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਮਿਆਰੀ ਥਰਮਾਮੀਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਪੀਸੀਆਰ ਫੇਲ ਹੋਣ ਦਾ ਇੱਕ ਕਾਰਨ ਇਹ ਵੀ ਹੈ।ਟਾਰਗੇਟ ਕ੍ਰਮ ਪਰਿਵਰਤਨ: ਜੇਕਰ ਟੀਚਾ ਕ੍ਰਮ ਪਰਿਵਰਤਿਤ ਜਾਂ ਮਿਟਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਟੈਂਪਲੇਟ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ ਖਾਸ ਬਾਈਡਿੰਗ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਇੱਕ ਖਾਸ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ ਦੇ ਕਾਰਨ ਪੂਰਕ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਗੁਆ ਦਿੰਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ. ਸਫਲ ਨਹੀਂ ਹੋਵੇਗਾ।

2. ਗਲਤ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਜੋ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਬੈਂਡ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਕਈ ਵਾਰ ਬੈਂਡ ਵਧੇਰੇ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਅਤੇ ਚਮਕਦਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਅਣਉਚਿਤ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ: ਚੁਣੇ ਹੋਏ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਗੈਰ-ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਨਾਲ ਸਮਰੂਪਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਇੱਕ ਗੈਰ-ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਟੀਚਾ ਕ੍ਰਮ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੈ ਜਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਝੂਠੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਮੁੜ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਜਾਂ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦਾ ਅੰਤਰ-ਦੂਸ਼ਣ: ਇਸ ਗੰਦਗੀ ਦੇ ਦੋ ਕਾਰਨ ਹਨ: ਪਹਿਲਾ, ਪੂਰੇ ਜੀਨੋਮ ਜਾਂ ਵੱਡੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਕ੍ਰਾਸ-ਗੰਦਗੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਝੂਠੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਝੂਠੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨੂੰ ਨਿਮਨਲਿਖਤ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਹੱਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਬੰਦੂਕ ਵਿੱਚ ਚੂਸਣ ਜਾਂ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚੋਂ ਬਾਹਰ ਨਿਕਲਣ ਤੋਂ ਰੋਕਣ ਲਈ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਸਾਵਧਾਨ ਅਤੇ ਨਰਮ ਰਹੋ।ਪਾਚਕ ਅਤੇ ਪਦਾਰਥਾਂ ਨੂੰ ਛੱਡ ਕੇ ਜੋ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ ਦਾ ਸਾਮ੍ਹਣਾ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦੇ, ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਜਾਂ ਉਪਕਰਣਾਂ ਨੂੰ ਉੱਚ ਦਬਾਅ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਜੀਵ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਸਾਰੀਆਂ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ ਅਤੇ ਸੈਂਪਲ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪਸ ਨੂੰ ਇੱਕ ਵਾਰ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਜੇ ਲੋੜ ਹੋਵੇ, ਤਾਂ ਮੌਜੂਦ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਨੂੰ ਨਸ਼ਟ ਕਰਨ ਲਈ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬਾਂ ਅਤੇ ਰੀਐਜੈਂਟਾਂ ਨੂੰ ਅਲਟਰਾਵਾਇਲਟ ਰੋਸ਼ਨੀ ਨਾਲ ਕਿਰਨਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਦੂਜਾ ਹਵਾ ਵਿੱਚ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਛੋਟੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਗੰਦਗੀ ਹੈ।ਇਹ ਛੋਟੇ ਟੁਕੜੇ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਤੋਂ ਛੋਟੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਕੁਝ ਸਮਰੂਪਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਨਾਲ ਵੰਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਪੂਰਕ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਝੂਠੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਨੇਸਟਡ ਪੀਸੀਆਰ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਘਟਾਇਆ ਜਾਂ ਖਤਮ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

 

3. ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਹਨ PCR ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣ ਵਾਲੇ ਬੈਂਡ ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਆਕਾਰ ਦੇ ਨਾਲ ਅਸੰਗਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਾਂ ਤਾਂ ਵੱਡੇ ਜਾਂ ਛੋਟੇ, ਜਾਂ ਦੋਵੇਂ ਖਾਸ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ 'ਤੇ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਹਨ।ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਬੈਂਡਾਂ ਦੀ ਦਿੱਖ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹਨ: ਪਹਿਲਾਂ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਪੂਰਕ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ, ਜਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਾਇਮਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇਕੱਠੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਦੂਜਾ ਕਾਰਨ ਇਹ ਹੈ ਕਿ Mg2+ ਆਇਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ, ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ, ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ।ਦੂਜਾ ਕਾਰਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ ਹੈ।ਕੁਝ ਸਰੋਤਾਂ ਤੋਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਅਕਸਰ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਬੈਂਡਾਂ ਦਾ ਸ਼ਿਕਾਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਪਰ ਦੂਜੇ ਸਰੋਤਾਂ ਤੋਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ।ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਮਾਤਰਾ ਕਈ ਵਾਰ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਜਵਾਬੀ ਉਪਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ: ਜੇਕਰ ਲੋੜ ਹੋਵੇ ਤਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਮੁੜ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰੋ।ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਘਟਾਓ ਜਾਂ ਇਸ ਨੂੰ ਕਿਸੇ ਹੋਰ ਸਰੋਤ ਨਾਲ ਬਦਲੋ।ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਘਟਾਓ, ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਉਚਿਤ ਢੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾਓ, ਅਤੇ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਘਟਾਓ।ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਉਚਿਤ ਢੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾਓ ਜਾਂ ਦੋ-ਤਾਪਮਾਨ ਬਿੰਦੂ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (93 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਡੀਨੈਚੁਰੇਸ਼ਨ, ਐਨੀਲਿੰਗ ਅਤੇ 65 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ ਆਲੇ-ਦੁਆਲੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ)।

 

4. ਫਲੈਕੀ ਡਰੈਗ ਜਾਂ ਸਮੀਅਰ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਈ ਵਾਰ ਸਮੀਰਡ ਬੈਂਡ, ਸ਼ੀਟ-ਵਰਗੇ ਬੈਂਡ ਜਾਂ ਕਾਰਪੇਟ-ਵਰਗੇ ਬੈਂਡਾਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਹਨ।ਕਾਰਨ ਅਕਸਰ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਜਾਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾੜੀ ਗੁਣਵੱਤਾ, ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ dNTP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ, ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ, ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ, ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਚੱਕਰਾਂ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਵਿਰੋਧੀ ਉਪਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ: ① ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਘਟਾਓ, ਜਾਂ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਕਿਸੇ ਹੋਰ ਸਰੋਤ ਨਾਲ ਬਦਲੋ।②dNTP ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਨੂੰ ਘਟਾਓ।Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਉਚਿਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘਟਾਓ।ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਧਾਓ ਅਤੇ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਘਟਾਓ